组织蛋白酶K与人椎间盘退变相关性研究

时间: 2017-04-17 15:00:03 来源:未知 作者:admin 点击:35 次
  

                作者:王宗亮,刘雅,蔡明,王敏,王尚,史建刚

【摘要】  目的 检测正常和退变人椎间盘细胞中组织蛋白酶K(Cath?K)的表达,探讨Cath?K与椎间盘退变的相关性。方法 用免疫组化S?P法和ELISA法对30例腰椎间盘突出症患者椎间盘组织中Cath?K进行检测,并取15例健康成人(尸体)和脊柱骨折手术患者正常椎间盘组织作对照。结果 正常组15例和退变组30例椎间盘中均有Cath?K表达,退变组表达水平明显高于正常组,差异显著(P<0.05 ) 。结论 Cath?K可能参与了椎间盘退变的病理改变。

【关键词】  组织蛋白酶K;椎间盘;基质

    Abstract:  Objective  To detect the expression of cathepsin K in  the cells of normal and degenerative intervertebral disc in humans,and to explore the relationship between them.Methods  Immunohistochemical S?P method and ELISA method were used to detect the expression of cathepsin K,containing of 30 specimens of intervertebral disc tissues of  patients with prolapse of lumber intervertebral disc.The control group consisted of 15 healthy adults(cadaver) and surgical patients with spinal fracture,whose intervertebral disc tissue was normal.Results  Fifteen specimens in normal group and thirty specimens in degeneration group all had cathepsin K expression.The expression in degeneration group was significantly higher than that of control group.The difference was significant(P<0.05).Conclusion  The cathepsin K may play a role in the pathological process of intervertebral disc degeneration.

    Key words:cathepsin K;intervertebral disc;matrix

     组织蛋白酶K(cathepsin K,Cath?K)是一种溶酶体半胱氨酸蛋白水解酶,其基因定位于染色体1q21.2,存在于多种组织细胞中,参与结缔组织的分解代谢,通过对比检测Cath?K在正常与退变椎间盘中的表达,探讨Cath?K与椎间盘退变关系,国内外均未见相关文献报道。我们这次采用免疫组化S?P法和酶联免疫法(ELISA)检测Cath?K在人椎间盘细胞中的表达,并进一步探讨Cath?K与椎间盘退变的相关性,为椎间盘退变机制的研究及延缓和治疗椎间盘退变提供理论依据。

     材料与方法

    1  临床资料及分组

    实验所用椎间盘标本取自术中(2006年10月~2007年3月在本院骨科手术治疗的患者)及新鲜尸体。退变组30例,取自腰椎间盘突出症行显微内窥镜椎间盘摘除术(MED)患者,男性18例,女性12例;年龄25~76岁,平均52岁。正常组15例,取自无椎间盘突出症的脊柱骨折手术自愿捐献患者和健康成人(尸体),男性10例,女性5例;年龄17~40岁,平均23岁。术中所取标本经MRI T2加权信号改变,尸检标本经病理检查验证所取标本的可靠性。鼠抗人Cath?K单克隆抗体(即用型)和S?P免疫组化试剂盒购自武汉博士德生物技术有限公司,Cath?K Elisa试剂盒购自Endogen公司。

    2  方法

    免疫组化染色及结果判断:5μm石蜡切片经脱蜡、脱二甲苯、水化后用体积分数3%的H2O2室温孵育15分钟,封闭内源性过氧化氢酶,抗原修复后PBS浸泡冲洗3次,每次3分钟,滴加抗体后置于4°C冰箱过夜。免疫组织化学染色程序严格按说明书进行。每批均设立阴性及阳性对照,PBS缓冲液(配方:pH 7.4,KH2PO4,Na2HPO4,Nacl,Kcl)代替一抗作阴性对照,已知染色阳性的乳腺癌组织切片作为阳性对照。结果判断:Cath?K阳性染色定位于细胞浆,呈棕黄色染色为阳性。计数阳性细胞百分率和观察染色强度,以二者乘积得分作为阳性强度判断依据。随机选取5个高倍(放大400倍)视野,阳性细胞百分比<15%计“0”分,16%~50%计“1”分,51%~70%计“2”分,>70%计“3”分。着色强度为淡黄色计“1”分,棕黄色计“2”分,棕褐色计“3”分。两项相乘之积为0~1分计为“阴性”,2~3分计为“弱阳性”,4~5分计为“中度阳性”,6~7分计为“强阳性”。

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