电针“内关”、“神门”预处理对急性心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞尾加压素Ⅱ的影响

时间: 2017-05-13 08:00:11 来源:未知 作者:admin 点击:66 次
  

                 作者:汪克明 王月兰 刘婧 吴子建 李晓民  

【摘要】  [目的]观察心肌细胞内尾加压素Ⅱ在电针“内关”和“神门”预处理对急性心肌缺血再灌注大鼠保护中的作用。[方法]选健康雄性成年SD大鼠80只随机分为正常组、模型组、电针预处理组和尾加压素Ⅱ特异性拮抗剂组。同等条件下喂养,在模型复制前3d予以电针“内关”和“神门”、以及尾静脉注射尾加压素Ⅱ特异性拮抗剂;采用左冠状动脉前降支穿线法复制急性心肌缺血再灌注模型,心电图监视。选取模型复制成功大鼠10只纳入统计。[结果]模型组大鼠缺血再灌注心肌细胞内尾加压素Ⅱ含量较正常组明显减少,电针“内关”和“神门”预处理组虽也显著下降,但较模型组少(P<0.01);而特异性拮抗剂组则与模型组没有显著差异(P>0.05)。[结论]电针“内关”、“神门”预处理可以有效抵抗急性心肌缺血再灌注损伤,尾加压素Ⅱ在此效果中具有重要作用。

【关键词】  心肌缺血 再灌注损伤 电针 内关 神门 尾加压素

本实验观察了电针“内关”、“神门”对心肌缺血再灌注大鼠缺血心肌细胞内尾加压素Ⅱ含量的影响,为进一步探讨针刺预处理的心肌保护和针刺“治未病”理论提供实验依据。

  1  材料和方法

  1.1  实验动物及分组  同等条件下饲养健康成年雄性SD大鼠80只,体质量(220±20)g(安徽全椒实验动物有限公司提供,合格证号:(99)量认(苏)字(Z0582)号)。随机分为4组,分别为正常对照组、I/R模型组、针刺预处理组、UII特异性受体拮抗剂组,每组20只。

  1.2  试剂和仪器  UII检测试剂盒(UNIONHONEST#ADL,批号:110D2356);BIOPAC十六导生理纪录仪(美国加州产,11A2055系列);全自动生化分析仪(丹麦DAKO公司);PCE-A型程控电针治疗仪(安徽天恒科技实业有限公司);DY89?Ⅱ型电动玻璃匀浆机(宁波新芝生物科技有限公司);TGL?16高速离心机(江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司)

  1.3  实验条件  动物于安静的环境下分笼饲养,室温控制在22±1℃(空调)的范围内,相对湿度60%左右,自然光照,塑料笼内以消毒木屑为垫料,食水自取。

  1.4  模型处理方法  正常对照组同等条件下饲养,不做其它任何处理;模型对照组同等条件下饲养,3天后直接造模,不做其他处理;针刺预处理组和拮抗剂组每天电针1次,连续3d。第3天针刺结束后即刻造模。

  1.5  急性心肌缺血模型复制和评定  模型复制前先记录正常时心电图,心电图异常者淘汰不用,心电图记录采用针形电极插入大鼠四肢皮下,常规连接Biopac多道生理记录仪,记录标准Ⅱ导联ECG。
    
  大鼠用乙醚麻醉后,固定,沿胸骨左缘剪开皮肤,用止血钳游离大鼠左侧的胸大肌,暴露左第3、4肋,可以清晰的看到心脏的暗影,用弯头止血钳沿胸骨左缘3、4肋间穿透胸膜,挤出心脏,用4/0医用缝合线在冠状动脉左前降支挂线,然后迅速将心脏送回胸腔,医用缝合线的两端留置体外备用。用长嘴止血钳把胸部皮肤和肌肉以及心脏挂线夹紧,防止气胸,观察心电图变化,T波高耸或者倒置为心肌缺血标志,如心电图改变不明显,则稍稍松一点止血钳,拉紧一端线头,这时则可以明显的看到心电图改变,30min后,再灌注时,松开止血钳,形成再灌注损伤模型。从开胸到关闭胸腔,控制在1min以内完成。根据模型复制前后心电图变化情况初步判断、评价心肌缺血大鼠模型复制成功与否。

  1.6  穴位及电针参数选择  “神门”“内关”穴位的定位参照《大鼠穴位图谱的研制》[1]。根据以往的实验研究结果,参考《实验针灸学》每天定时将电针组和拮抗剂组大鼠放入固定器中,选取“神门”,“内关”穴,酒精消毒所取穴位,0.5寸毫针,直刺1mm,接通电针仪,给与电针刺激,刺激参数为:刺激电压5V,电流强度1~2mA,频率为2Hz,波宽300μm,正负向交替方波刺激,每次30min,1次/d,电针3d。第三天针刺后进行造模,约距第一次针刺时间48~50h。

  1.7  标本取材及检测  模型复制成功后24h,10%水合氯醛(0.36ml/100g体质量)腹腔注射麻醉大鼠,腹主动脉真空管采血,离心,选取上层血浆,即刻标记放入液氮冷藏保存;同时取大鼠左心室心尖部缺血区心肌组织,称重,按照1∶9的比例加入生理盐水,匀浆,离心,选取上清液,治成10%的组织溶液,标记放入液氮冷藏保存待测。严格按照试剂盒操作规范,用ELASE方法测量心肌组织液中的UП含量。

  1.8  统计学处理  实验数据采用均数±标准差(x+s)表示,各组间均数比较采用单因素方差分析(One?way ANOVA),组间均数的两两比较采用q检验(Newman?Keuls test)法,P<0.05有统计学意义。数据的处理采用SPASS for windows11.0软件分析。

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