银屑病角质形成细胞凋亡与Fas/FasL表达的关系

时间: 2017-07-25 04:00:06 来源:未知 作者:admin 点击:81 次
  

【摘要】    目的 探讨银屑病皮损中角质形成细胞(KC)凋亡与Fas/FasL表达的关系。 方法 免疫组化ABC法对银屑病患者皮损中Fas、FasL表达进行检测,TUNEL法检测皮损中KC凋亡情况。 结果 银屑病皮损中既可表达Fas,又可表达FasL,而在正常皮肤不表达;患者皮损中KC发生凋亡的比例明显高于正常对照组(P<0.01),但病程的不同阶段其细胞凋亡指数(AI)不同,进行期高于静止期。 结论 KC凋亡参与了银屑病的发病过程,Fas、FasL对角质形成细胞凋亡有调节作用。

【关键词】  银屑病 角质形成细胞 细胞凋亡 Fas FasL

  【Abstract】  Objective  To study the relationship between keratinocyte(KC) apoptosis and expression of Fas/FasL in the lesions of psoriasis. Methods  Apoptosis of KC were measured by TUNEL. Immunohistochemical technique-Avidin biotin comples (ABC) were employed to syudy the expression of Fas,FasL in the lesions of patients. Results  Both Fas and FasL were expressed in the lesions , and no expressed in normal skin.The higher frequency of apoptosis KC was obseverd in progressive stage of psoriasis lesions,and the frequency reduced in static stage psoriatic lesions and normal skin(P<0.01). Conclusions  There may be a close relationship between the development of psoriatic lesion and apoptosis of KC. Fas/FasL might be involved in the pathogenesis of psoriasis.

  【Key Words】  psoriasis  keratinocyte  apoptosis  Fas  FasL   

  近年来银屑病发病与细胞凋亡的关系逐渐受到重视,Fas/FasL是现今研究较多、较为重要的细胞凋亡相关基因。作者应用免疫组化和TUNEL法对银屑病患者皮损中Fas、FasL的表达和皮损中角质形成细胞凋亡进行了检测。结果报告如下

  1  对象和方法

  1.1  研究对象  寻常型银屑病26例,其中男14例,女12例,年龄15~65岁(平均28.5岁);进行期13例,静止期13例;病程6个月~16年(平均8.3年)。正常对照组10例来自整形外科正常皮肤,其中男6例,女4例,年龄18~51岁(平均25.8岁)。两组患者年龄、性别无统计学差异,具有可比性。

  1.2  试剂  细胞凋亡检测试剂盒、Fas、FasL兔抗人多克隆抗体(工作浓度均为1:150)购于北京中山生物技术有限公司,用试剂盒附带的肺癌石蜡切片为阳性对照,PBS液代替一抗作阴性对照。

  1.3  方法  (1)免疫组化:石蜡切片(约4μm)常规处理后,微波炉抗原修复,依次加入稀释的一抗、生物素标记二抗、SABC,DAB显色、苏木素复染。结果按着色强弱分级:无着色为0,浅黄色为1,深黄色为2,棕黄色为3。着色范围以在×40倍镜下随机选取5个视野(每个视野计数100个细胞)计数阳性细胞所占的百分比均值,<25%为1,25%~50%为2,>50%为3。上述两项相加即为Fas、FasL表达强度积分,<2为阴性,≥2<3为弱阳性(+),3~4为阳性(++),>4为强阳性(+++)。(2)TUNEI染色:切片脱蜡入水,蛋白酶K消化15min,置体积分数0.03的H2O室温处理20min,标记缓冲液湿盒中37℃孵育60min,1:50稀释的亲和素-辣根过氧化物酶37℃孵育30min,DAB显色液显色10min,苏木素复染,镜检,细胞核中有棕黄色颗粒者即为凋亡阳性细胞,在每张阳性片随机取5个阳性细胞最多的高倍视野(×400)计算凋亡指数(AI)。

  1.4  统计学分析  采用SPSS 12.0软件包处理,样本表达强度比较用秩和检验,细胞凋亡比较用方差分析。

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