染料木素对肝损伤后促进肝功能恢复的实验研究

时间: 2017-07-25 10:00:05 来源:未知 作者:admin 点击:60 次
  

                作者:贾曾荣 陈必成 余震?张培趁 姚建高

【摘要】  目的 探讨染料木素对硫代乙酰胺(TAA)所致肝损伤的保护作用,并分析其可能的临床应用价值。 方法 Wistar雄性大鼠腹腔给予硫代乙酰胺法建立急性肝损伤模型。肝损伤的同时,治疗组皮下给予溶于DMSO的染料木素,对照组皮下给予二甲基亚砜(DMSO),正常组由同样途径给予生理盐水。在最后一次注射硫代乙酰胺36h后分析大鼠外周血中肝功能指标,并进行肝病理学分析。 结果 在建模1周内对照组死亡4只(病死率33.33%),治疗组和正常组未出现死亡(P<0.05)。治疗组和对照组大鼠体重显著减轻(P<0.01),在停止注射TAA 36h后,三组行非参数统计比较,发现除乳酸脱氢酶(LDH)差异无统计学意义外,谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)、谷氨酰转移酶(γ-GT)、碱性磷酸酶(ALP)、胆汁酸(TBA)均存在明显差异(P<0.05)。治疗组与对照组比较,除AST、γ-GT无统计学差异外,ALT、TBIL、ALP、TBA、LDH都存在不同程度的降低(P<0.05)。但各组病理学检查未发现有明显差异。 结论 染料木素对肝损伤后肝功能恢复有一定的促进作用。

【关键词】  染料木素 硫代乙酰胺 肝损伤

  【Abstract】  Objective  To explore the protection effect of genistein on hepatic injury induced by TAA and its possible clinical application. Methods  Acute hepatic injury model on Wistar male rats was constructed. The treatment group was given genistein in DMSO,the control group was given dimethyl sulfoxide(DMSO),the blank control group was given normal sodium. The liver function parameter of rats was analyzed 36 hours later after the last TAA was given, and the pathological changle of liver was analyzed too. Results  During one week of modeling,four rats of the control group died(death rate 33.33%),the treatment group and the blank control group had no death(p=0.047).The weights of rats of the treament group and the control group were reduced significantly (P<0.01),36 hours later after stopping giving TAA,different indice of three groups were compared  with nonparametric statistics .Compared with blank control group group , there were signicificant difference in glutamate-pyruvate transaminase(ALT)、aspartate aminotransferase(AST)、total bilirubin(TBIL)、glutamyl-transferase(γ-GT)、alkali phosphatase(ALP) and bile acid(TBA) (P<0.05) in treatment group and control groups(P<0.05) except the lactate dehydrogenase(LDH). There was significant difference in ALT、TBIL、ALP、TBA、LDH between treatment group and control group ,except AST andγ-GT (P<0.05). there was no obviously difference in pathology in all groups. Conclusions  Genistein has protection effects on live funtion after hepatic injury.

  【Key words】  genistein  thioacetamide (TAA)  hepatic injury   
  
  肝损伤是肝细胞在外来因素干预下发生氧化应激、炎症反应、细胞破坏的过程,反复的肝细胞破坏和修复导致肝纤维化。染料木素是大豆提取物中异黄酮类的主要成分,以往有实验证实其具有抗氧化、抑制免疫激活和抗纤维细胞增殖的作用,可能具有对肝损伤的保护作用和有利于肝纤维化的预防。但目前国内外尚无相关的实例研究报道,本实验旨在建立持续的肝损伤模型,在染料木素干预下,观察其对恢复阶段肝功能的影响和其对肝脏的保护作用,为进一步探讨其肝保护作用和治疗肝纤维化价值提供实验基础。

  1  材料与方法

  1.1  材料  清洁级雄性Wistar大鼠32只,体重250g,购于温州医学院实验动物中心。TAA购于上海凌峰化学试剂有限公司,DMSO购于汕头西陇化工厂,染料木素购于华昌生物有限公司。ALT、AST、TBIL、DBTIL、γ-GT、ALP、TBA、LDH试剂购于科华东菱公司。

  1.2  实验分组  正常组由同样的腹腔、皮下途径给予生理盐水(n=8),对照组建立肝损伤模型同时每天给予DMSO (n=12),治疗组在肝损伤模型基础上每天给予溶解于DMSO的染料木素(n=12)。

  1.3  肝损伤模型  将TAA溶解于生理盐水中,每只大鼠按100mg/kg腹腔注射TAA溶液,1次/d,共连续7d。

  1.4  给药及观察  治疗组在建模开始前1d即给予染料木素,每24h给药1次。腹腔注射TAA同时对照组皮下注射0.2ml/(kg?d)DMSO,或60mg/(kg?d)染料木素,溶剂为0.2ml/(kg?d)的DMSO,正常组由同样的腹腔、皮下途径给予等量生理盐水。每天观察动物2次,记录大鼠体重及一般状态。

  1.5  肝功能检测  停止注射TAA溶液36h后,在乙醚麻醉下,通过下腔静脉取血,肝素抗凝。所得血经1500rpm离心立即送检,ALT、AST、TBIL、DBTIL、γ-GT、ALP、TBA、LDH指标采用酶法在日立7600自动分析仪上检测。

  1.6  病理检测  取肝脏固定于4%多聚甲醛,按常规包埋、制片、HE染色,光镜下观察肝细胞形态。

  1.7  其他  实验室定期紫外线照射,注射用针头和现配的药物保持无菌,以排除感染对实验的影响。

  2  结果

  2.1  染料木素降低大鼠肝损伤的病死率  在模型建立过程中,对照组大鼠死亡4只(33.33%),治疗组和正常组未出现死亡,对照组病死率明显高于治疗组和正常组(P<0.05)。对照组、治疗组与正常组大鼠比较,体重有显著减轻(P<0.001),模型第4天,正常组体重明显重于治疗组和对照组[正常组(263±7.95)g 、治疗组(223.42±10.00)g、对照组(216±6.95)g,P<0.001],治疗组体重明显高于对照组(P<0.05)。实验结束时(第9天),正常组体重值最高[正常组(263.63±15.82)g,治疗组(220.17±12.62)g,对照组(208.43±9.61)g,P<0.001],治疗组体重仍然高于对照组(P<0.05)。对照组大鼠精神较治疗组明显萎靡。

  2.2  染料木素有利于肝功能恢复  肝损伤恢复期,正常组、治疗组在血浆AST、TBIL、γ-GT、ALP、TBA等指标上差异非常显著(P<0.01),而在ALT、LDH指标上差异无显著性(P>0.05)。而对照组与治疗组之间在ALT、TBIL、ALP、TBA、LDH指标上存在不同程度的差异(P<0.05),而在AST、γ-GT指标上两者无明显差异(P>0.05),见表1。

  2.3  病理观察  HE染色后对恢复期肝脏细胞变性、坏死、炎性细胞浸润等情况进行观察,发现除对照组局部偶见细胞变性改变外,对照组、治疗组和正常组细胞形态均未见明显病理改变。

  表1  各组肝功能指标比较 略

  3  讨论
   
  染料木素是大豆中含有的一种异黄酮,其结构与雌激素相似,可通过多种化学或离心法提取。主要在人体肠道内代谢和吸收,再转运至肝脏,通过肾脏排泄。染料木素除具有类雌激素的作用外,还具有抗氧化应激、抗炎、稳定细胞膜和抗细胞增殖的作用,为潜在的抗纤维增生剂[1]。诸多肝硬化模型中以TAA诱导的模型最接近人类,模型相对稳定,具较好的应用价值。染料木素具有雌激素样作用,为排除雌性大鼠的雌激素对实验的干扰,故选用雄性大鼠。肝纤维化是肝细胞不断损伤和修复导致的结果,减少肝损伤是抗肝细胞纤维化的关键。肝功能可间接反映肝损伤,故有必要探讨染料木素治疗后大鼠在肝损伤恢复期的肝功能情况。

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