榄香烯联合三苯氧胺对乳腺癌MCF

时间: 2017-08-30 02:00:11 来源:未知 作者:admin 点击:31 次
  

                  作者:周小娟,郑棋,赵小丽,马海琳   

【关键词】  乳腺癌;三苯氧胺;榄香烯;协同作用

  摘要: 目的  观察榄香烯和三苯氧胺对乳腺癌细胞的抑制效应,尤其是两者联合应用有无协同增效作用。方法  将MCF7细胞培养于RPMI1640培养基中,置入37℃,100%湿度,5%(体积分数)的CO2培养箱内。接种细胞并加入实验药物,用CCK8法检测三苯氧胺联合榄香烯对细胞的增殖抑制效应,用酶标仪在450nm测量每孔吸光度值,计算每组细胞抑制率。结果  无毒剂量的榄香烯与治疗剂量的三苯氧胺联合应用,吸光度均值较单用三苯氧胺明显下降,并且相应的细胞抑制效应较单用组明显上升。结论  无毒剂量的榄香烯能够使三苯氧胺对乳腺癌细胞的抑制效应显著增强,提示榄香烯与三苯氧胺联合应用具有协同作用。

  关键词:乳腺癌;三苯氧胺;榄香烯;协同作用

  The inhibitory effect of elemene combined with tamoxifen on the breast cancer MCF7 cell line

  ABSTRACT: Objective  To explore if elemene can synergize tamoxifen through using noncytotoxic dose of elemene and tamoxifen in combination on MCF7cell line of breast cancer. Methods  First, MCF7 cell line was cultured in RPMI1640. Then, TAMs inhibitory effect united with elemene on MCF7 cell line was analyzed by using CCK8 test. Results  When adding noncytotoxic dose of elemene and curative dose of tamoxifen into the two experimental groups, the absorptivity in the two groups reduced notably, compared with that of the groups using tamoxifen alone; accordingly, the inhibition rate in two mixing groups increased obviously compared with that in singledrug groups. Conclusion  Elemene of innocuous dose can remarkably enhance the inhibitory effect of tamoxifen, which indicates that elemene may synergize the effect of tamoxifen on breast cancer.

  KEY WORDS:breast cancer; tamoxifen; elemene; synergistic effect

  乳腺癌是妇女中最常见的恶性肿瘤。它是一种全身性疾病,全身辅助治疗可降低复发和死亡的风险[1]。乳腺癌内分泌治疗作为全身治疗的方法之一,在乳腺癌术后预防复发及转移后的治疗具有十分重要的作用[2] 。三苯氧胺(tamoxifen, TAM)作为内分泌治疗一线药物已经广泛应用于乳腺癌高危妇女的预防性治疗[3]以及乳腺癌雌激素受体阳性(ER+)患者的辅助内分泌治疗[4]。然而同类抗雌激素药物对于TAM治疗失败者却效果甚微;第3代芳香化酶抑制剂作为绝经后TAM治疗失败后的二线药物,虽具有高效、选择性、毒副作用少等特点,但仅对绝经后患者有效,且价格较TAM高。TAM作为乳腺癌患者内分泌治疗的首选药物,长期应用有可能增加子宫内膜癌的危险性[56]。还会产生继发耐药或肿瘤的复发和转移,均影响其临床疗效。本研究采用中药莪术提取物榄香烯(elemene, ELE)和TAM联合应用于乳腺癌MCF7细胞系,探索ELE对TAM有无协同增效作用,从而为ELE参与乳腺癌的辅助治疗,提高内分泌药物的疗效开辟新的思路。

  1  材料与方法

  1.1  主要试剂  乳腺癌MCF7细胞株,由西安交通大学医学院病理学系提供;RPMI1640培养基和胰蛋白酶,购自美国Gibco公司;胎牛血清(FBS)购自(中国)鼎国公司;胰岛素、EDTA和三苯氧胺(TAM)系美国Sigma公司产品;CCK8试剂由同仁化学研究所中国(上海)代办处提供;榄香烯(ELE)4℃冰箱保存,系中国大连金港制药有限公司产品。

  1.2  常用工作液的配制  ①磷酸缓冲液(PBS)的配制:称取KCl 0.2g,KH2PO4 0.2g,NaCl 8.0g, Na2HPO4・12H2O 2.89g,混合溶解于1000mL的双蒸水中,并调定pH 7.2-7.4。② 消化液的配制:胰蛋白酶粉末0.25g,EDTA 0.04g,加入PBS 液100mL并用磁力搅拌器使其完全溶解,0.22μm微孔滤膜过滤除菌,分装,于-20℃保存。

  1.3  细胞培养  将MCF7细胞培养于含100mL/L胎牛血清的RPMI 1640培养基中,37℃,100%湿度,5%(体积分数)的CO2培养箱内。

  1.4  CCK8法检测三苯氧胺联合榄香烯对细胞增殖的抑制效应  将细胞接种于96孔培养板,培养24h。以8孔为一组分别加入4个不同浓度的TAM(T2-T5,即1.50×10-5、1.50×10-6、1.50×10-7、1.50×10-8mol/L)和4个不同浓度的ELE( E1-E4,即6.15×10-1、6.15×10-2 、6.15×10-3、6.15×10-4g/L)溶液,最后加入2种不同浓度的混合液,在培养箱内培养48h。然后每孔加入10μL CCK8液,培养4h,用酶标仪在450nm测量每孔吸光度值,计算每组细胞抑制率。

  1.5  数据分析  用SPSS 11.5统计分析软件进行方差分析,采用LSD及Dunnett法两两比较进行描述性统计,方差齐性检验和绘制均数分布图(α :0.01)。

  2  结果

  2.1  TAM、ELE不同浓度组平均吸光度的变化规律  随着TAM的浓度由T2组-T5组(1.50×10-5、1.50×10-6、1.50×10-7、1.50×10-8mol/L)逐渐降低,平均A值逐渐升高;随着ELE的浓度由E1组-E4组(6.15×10-1、6.15×10-2 、6.15×10-3、6.15×10-4g/L)逐渐降低,平均A值逐渐升高,将无毒剂量(6.15×103 g/L)的ELE与中等有效剂量的TAM合用后,两联合用药组(T3E3组与T4E3组)的平均A值均较单用药组(T3、T4和E3组)的平均A值明显下降(图1)。
   
  随着TAM的浓度由T2组-T5组逐渐降低,平均抑制率[存活率(%)=用药组吸光度/对照组吸光度×100%;抑制率(%)=1-存活率]逐渐下降;随着ELE的浓度由E1组-E4组逐渐降低,相应各组细胞的平均抑制率则逐渐下降。由此可见TAM和ELE对MCF7细胞的抑制效应均具有剂量依赖性,其平均抑制率分别与其浓度呈正相关(图2)。

  图1  各组吸光度均数分布图(CCK8)(略)

  Fig.1 The scatter gram of each group s mean absorptivity by CCK8 method

  T: TAM(mol/L); T2: 1.5×10-5; T3: 1.5×10-6; T4: 1.5×10-7; T5: 1.5×10-8; E: ELE (g/L); E1: 6.15×10-1; E2: 6.15×10-2; E3: 6.15×10-3; E4: 6.15×10-4

  图2  TAM与ELE作用下各加药组细胞抑制率的变化曲线(略)

  Fig.2 The changes of inhibition rate with different concentration of TAM and ELE

  T: TAM(mol/L); T2: 1.5×10-5; T3: 1.5×10-6; T4: 1.5×10-7; T5: 1.5×10-8; E: ELE (g/L); E1: 6.15×10-1; E2: 6.15×10-2; E3: 6.15×10-3; E4: 6.15×10-4

  2.2  TAM、ELE不同浓度组吸光度变化的比较  结果见表1。

  表1  各组间A值均数的差异性的比较(略)

  Table 1  Comparison of the variability among the A means in all groups

  a: P<0.01, compared with control; b: P<0.01, T3-T4E3 vs. T2; c: P<0.01, T4-T4E3  vs. T3; d: P<0.01, T5-T4E3  vs. T4; e: P<0.01, E1-T4E3  vs. T5; f: P<0.01, E2-T4E3  vs. E1; g: P<0.01, E3-T4E3  vs. E2; h: P<0.01, E4-T4E3  vs. E3; i: P<0.01, T3E3, T4E3 vs. E4; j: P<0.01, T4E3 vs. T3E3

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