人卵泡液TNF┐α和IL┐6的水平及其对卵巢功能的影响

时间: 2017-10-22 00:00:08 来源:未知 作者:admin 点击:11 次
   【关键词】  肿瘤坏死因子-α
  关键词: 肿瘤坏死因子-α;白细胞介素-6;卵泡液;雌激素;卵母细胞
     
  摘 要:目的  测定卵泡液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平,并探讨其与雌二醇(E2 )产生及卵母细胞成熟度的关系. 方法  酶联免疫法测定97份卵胞液及26份血清标本的TNF-α和IL-6水平,放射免疫法测定E2 水平,并记录每份卵泡液中卵母细胞的成熟度. 结果  卵泡液中TNF-α和IL-6水平分别为(26.5±7.2)ng L-1 和(328.0±48.7)ng L-1 ,分别较血清中TNF-α和IL-6的水平高9倍和20倍(P<0.01);卵泡液TNF-α和IL-6水平与卵泡液中E2 水平及卵母细胞成熟度呈正相关(r值为0.648和0.692,P<0.01). 结论  卵泡液中存在较高水平的TNF-α和IL-6,其与E2 产生及卵母细胞成熟度有一定关系.
  Keywords:tumor necrosis factor-α;interleukin-6;follicular fluid;estrogen;oocyte
     
  Abstract:AIM To detect the concentrations of tumor necrosis factor-α(TNF-α)and interleukin-6(IL-6)in human follicular fluid and to evaluate their relationships to estradiol production and oocyte maturity.METHODS TNF-αand IL-6concentrations in97samples of follicular fluid and26serum samples from26patients undergoing IVF-ET were measured with enzyme-linked immunosorbent assay,and estradiol lev-els were determined by radioimmunoassay.When follicular
 fluid samplas were obtained,oocyte maturity was identified.RESULTS TNF-αconcentration in follicular fluid was(26.5±7.2)ng L-1 ,and IL-6concentration was(328.0±48.7)ng L-1 .They were9times and20times higher than those in serum,respectively(P<0.01).In follicular fluid,the con-centrations of TNF-αand IL-6were directly proportional to estradiol level and oocyte maturity(P<0.01).CONCLU┐SION Higher concentrations of TNF-αand IL-6exist in fol-licular fluid and they may have a physiological role in promot-ing estradiol production and oocyte maturity.
     
  0 引言
     
  近年来的研究[1,2] 发现,免疫系统对女性生殖内分泌有某些调节作用,但确切机制尚未阐明.肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)是两个重要的免疫因子,主要由巨噬细胞产生,而卵泡液中存在大量的巨噬细胞[3] .因而我们测定了卵泡液中TNF-α和IL-6水平,以探讨其在卵巢功能局部调节中的作用.
     
  1 对象和方法
     
  1.1 对象  人卵泡液来自行输卵管配子移植或体外受精胚胎移植的患者,共计26(输卵管阻塞9,排卵障碍6,子宫内膜异位症5,免疫因素4,男方因素2)例,年龄平均29.4(26~36)岁,近期未患感染性疾病,血常规检查正常.促排卵及抽吸卵泡液的方法同我们以前的报道[4-6] .26例患者共抽得107份卵泡液,平均每人抽得4.1份(2~8份).其中10份标本有明显的血液污染(红细胞数大于4×106  L-1[7] ),弃之未用.余97份卵泡液于2000r min-1 ,离心10min,收集上清液,-40℃低温冰箱储存备用.抽卵泡液前抽取患者静脉血10mL,室温下凝固,留取血清,-40℃低温冰箱储存备用. 
  1.2 方法
     
  1.2.1 TNF-α和IL-6水平测定  采用双抗体夹心法测定卵泡液及血清中TNF-α和IL-6水平,酶联免疫试剂盒由本校免疫学教研室提供.将抗TNF-α和IL-6mAb T5和E6等量混合,以每孔4000ng包板,于4℃过夜.洗涤、封闭,加待测样本和标准TNF-α及IL-6,孵育.洗涤后加兔抗TNF-α抗体和兔抗IL-6抗体,最后加底物邻苯二胺显色,以H2 SO4 终止反应,自动酶标阅读仪(美国Bio-Red公司)测定吸光值,根据标准曲线求得待测样本TNF-α和IL-6含量.每份卵泡液及血清标本均重复实验2次,取其平均值. 
  1.2.2 E2 测定  采用放射免疫法同批测量卵泡液及血清标本中E2 水平,E2 放免检测药盒为上海生物制品研究所产品.
     
  1.2.3 卵母细胞成熟度判定  参照Moussie等[8] 标准判断卵母细胞成熟度.成熟或近成熟卵子:卵丘细胞充分伸展,放射冠细胞分散,透明带清晰可见,核及核仁消失,有时可见第一极体.未成熟卵子:卵丘细胞略伸展或紧裹着卵母细胞,透明带不清晰或看不见,可见细胞核及核仁.
    统计学处理:实验数据以t检验及r检验.
     
  2 结果
     
  2.1 卵泡液及血清中TNF┐α和IL┐6水平  97份卵泡液标本TNF-α水平在3~80ng L-1 之间,平均(26.5±7.2)ng L-1 .IL-6水平在46~1210ng L-1 之间,平均(328.0±48.7)ng L-1 .26份血清标本TNF-α和IL-6平均水平分别为(2.9±0.6)ng L-1 和(16.7±2.1)ng L-1 .卵泡液TNF-α和IL-6平均水平分别较血清TNF-α和IL-6水平高9倍及20倍(P<0.01).输卵管阻塞、排卵障碍、子宫内膜异位症、免疫因素及男方因素导致不孕的各组间卵泡液TNF-α和IL-6水平均无显著性差异(P>0.05).
     
  2.2 卵泡液及血清E2 水平及其与TNF┐α和IL┐6的关系  卵泡液及血清E2 平均水平分别为(14.1±2.3)μmol L-1 (2~20μmol L-1 )和(3.0±0.2)μmol L-1 (0.6~7.0μmol L-1 ),两者比较,差异非常显著(P<0.01).将97份卵泡液TNF-α和IL-6水平分别与卵泡液E2 水平进行相关性检验,结果均呈正相关(r值分别为0.648和0.692,P值均<0.01). 
  2.3 卵泡液TNF┐α和IL┐6水平与卵母细胞成熟度  共采集卵子128个,其中成熟及近成熟卵子101个,未成熟卵子27个.前者卵泡液TNF-α和IL-6平均水平分别为(27.0±6.5)ng L-1 和(336.0±47.5)ng L-1 ,后者卵泡液TNF-α和IL-6平均水平分别为(25.9±8.1)ng L-1 和(319.0±67.8)ng L-1 .两者比较,TNF-α和IL-6均相差非常显著(P<0.01).
     
  3 讨论
     
  TNF-α及IL-6是两个重要的免疫因子,主要由 免疫活性细胞产生,存在于多种组织及体液中,具有多种生物学功能.卵泡液中是否存在TNF-α和IL-6及其水平,研究报道不多,结论不一.Mola等[9] 认为卵泡液中存在IL-6,水平略高于血清水平.但也有的研究者认为,卵泡本身不能产生TNF-α和IL-6,卵泡液中TNF-α和IL-6是由血浆渗入的,其水平与血清水平一致.卵泡液中存在大量的巨噬细胞,而巨噬细胞是产生TNF-α和IL-6的主要功能细胞[3] .分子生物学研究也证实,卵巢细胞可表达TNF-α和IL-6mRNA[10,11] .本实验结果显示,卵泡液中TNF-α和IL-6水平分别为26.5ng L-1 和328ng L-1 ,较血清TNF-α和IL-6水平分别高9倍和20倍,而且不同病因导致的不孕症组之间无显著差异.Pellicer等[12] 也观察到卵泡液中的IL-6水平较血清高4~20倍.所以我们认为,卵泡液中存在较高水平的TNF-α和IL-6,他们是由卵巢自身产生的、与不孕症病因无关的生理因子.

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