一种简便实用的肿瘤体外侵袭模型

时间: 2017-10-22 13:00:11 来源:未知 作者:admin 点击:84 次
                         作者:常恒 张殿忠 马保安 文艳华 


【关键词】  肿瘤侵袭
  关键词: 肿瘤侵袭;体外;模型
         
  1 材料和方法
     
  1.1 材料  侵袭细胞,鸡胚,培养基,琼脂小牛血清,胰蛋白酶,HIPES恒温培养箱,CO2 孵箱,倒置显微镜等.
     
  1.2 方法  ①细胞球体的制备:用弯头吸管将长满瓶壁的瘤细胞层横割划成面积约1cm2 的方块,倒出培养液,加入适量2g L-1 的胰蛋白酶(不含EDTA)消化液,在倒置显微镜下边消化边观察,当划痕处出现细胞层卷起后立即终止消化,倒出消化液,加入含150g L-1 小牛血清的RPMI1640培养液3~5mL,吹打细胞使其呈小片状脱落,将细胞小片连同培养液一起移入底部铺有20g L-1 琼脂的培养瓶内,置37℃CO2 (50mL L-1 )孵箱内培养2~3d即成细胞球体;②球体器官块的制备:取孵育9d的鸡蛋,用750mL L-1 的酒精消毒后,超净台中从气室侧打开蛋壳,将鸡胚移入灭菌的培养皿中,剪开胸腔,取出心脏,剪去心房及大血管,用不完全培养液冲洗后将其剪成0.4mm3 的小块,将组织块移到200目的细胞筛上,再清洗2次后,移入底部铺有20g L-1 琼脂的培养瓶中,加RPMI1640完全培养液6mL(注意使心肌块均匀分布,否则易互相粘连),置37℃CO2 (50mL L-1 )孵箱内培养2~3d即可;③侵袭复合体的制备:将制备好的细胞球体与组织块球体移入底部铺有琼脂的24孔板内,每孔移入一对组织,使其紧密接触,培养2h后,每孔小心加入RPMI1640完全培养基1mL(勿将复合体冲散),继续培养.一般每2d换1次培养液即可,在培养1,3,5,7,10和14d后取材制作组织切片进行分析;④组织切片制作:用吸管将侵袭复合体(一般每次取3~5个)移入拭镜纸(2cm×2cm),包裹后置入固定液中固定24h,脱水盒中常规脱水、石蜡包埋、切片、HE染色.
     
  2 结果  
  应用本实验方法分别观察骨肉瘤细胞系OS-9901[1] ,成骨肉瘤细胞系SOSP-9607及CM-319细胞(待发表)的侵袭性,均得到满意结果.其中OS-9901细胞接触培养4d就将心肌块完全侵袭.
     
  3 讨论  
  我们研究的模型可用于:①确定组织培养细胞的恶性程度;②一个母细胞系分离出相似亚群后,进行侵袭能力的比较;③分析用已知癌基因转染细胞的侵袭性;④研究肿瘤侵袭机制;⑤筛选具有潜在抗侵袭因子和抗侵袭的药物.其特点是:①简便、实用,尤其适合尚不具备旋转摇动仪的实验室使用;②模拟了体内器官及实体瘤的结构,使侵袭更直观,更接近体内侵袭实际情况;③实验周期短,一般瘤细胞7~14d,恶性程度高的瘤细胞3~7d即可查见明显的侵袭现象. 
  参考文献:
     
  [1]张殿忠,范清宇,马保安,周 勇,张惠中,裘秀春.人骨肉瘤细胞系OS-9901的建立及其生物学特性[J].第四军医大学学报,1999;20(12):1048-1050.

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