充血性心衰大鼠严格限钠后肾素-血管紧张素系统的变化

时间: 2017-10-24 07:00:10 来源:未知 作者:admin 点击:68 次
                        作者:张素珍 徐永 万瑜 杨钢 

【关键词】  心力衰竭
    关键词: 心力衰竭,充血性;肾素-血管紧张素系统;膳食,限钠 
    摘 要:目的  观察充血性心衰大鼠严格限钠后循环与局部肾素-血管紧张素系统(RAS)的变化. 方法  将充血性心衰大鼠随机分为3组:心衰组、心衰限钠组、心衰补钠组,假手术大鼠为对照组,用放射免疫分析法和原位杂交技术分别测定各组血浆和心肌血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),醛固酮(Ald)含量及心肌血管紧张素原mRNA表达水平. 结果  心衰限钠组血浆AngⅡ,Ald含量[(225±20)ng・L-1 和(476±62)μg・L-1 ]及心肌AngⅡ含量[心房(20.1±4.5)ng・g-1 ,心室(27.3±5.9)ng・g-1 ]显著高于心衰组[(180±29)ng・L
-1 ,(248±58)μg・L-1 及(17.5±3.6)ng・g-1 ,(20.1±3.7)ng・g-1 ](P<0.05,P<0.01),心室肌Ang原mRNA表达水平(12.6±2.3)也显著高于心衰组(8.6±1.7)(P<0.05),血钠较心衰组下降5%(P<0.05);心衰补钠组心肌血管紧张素原mRNA表达水平与心衰组无显著差别,其余指标与对照组无显著差别. 结论  心衰后限钠进一步激活循环和局部RAS,加重钠水潴留.
      
  Keywords:heart failure,congestive;renin-angiotensin sys-tem;diet,sodium restricted
    
    Abstract:AIM To observe Changes of circular and local renin-angiotensin system(RAS)of rats with restriction of sodium intake after congestive heart failure.METHODS Congestive heart failure(CHF)rats were divided into three groups with sham operation rats group as control.Radioim-munassay and in situ hybrdization techniques were used to de-termine the plasma and myocardium angiotensionⅡ(AngⅡ)and aldosterone(Ald)contents and the expression of an-giotensionogen mRNA,respectively.RESULTS In sodium restricted group,the plasma AngⅡand Ald contents [(225±20)ng・L-1 ,(476±62)μg・L-1 ]and myocardium AngⅡcontents [atrial(20.1±4.5)ng・g-1 ,ventricle(27.3±5.9)ng・g-1 ]were significantly higher than those in CHF group [(180±29)ng・L-1 ,(248±58)μg・L-1 and(17.5±3.6)ng・g-1 ,(20.1±3.7)ng・g-1 ](P<0.05,P<0.01),and the ventricle angiotensionogen mRNA expression(12.6±2.3)were also obviously higher than those in CHF group(8.6±1.7)(P<0.05),and while the plasma sodium was5%lower than that in CHF group(P<0.05);In sodium supplemented group,the myocardium angiotensionogen mR-NA expression had no obvious change compared with the CHF group,the other items had no differentiation as com-pared with the control.CONCLUSION Restriction of sodi-um intake after CHF can activate the circular and local RAS further and then worsen the sodium and water retention.
     
  0 引言
     
  充血性心力衰竭(congestive heart failure,CHF)时,肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)常过度激活,但由于其保钠、保水和缩血管作用,常使CHF时钠水潴留加重[1-3] .而临床上针对钠水潴留所采取的常规限钠治疗又常引起低钠血症[4] ,反而加重心衰.这种限钠治疗对CHF的影响是否通过RAS的作用来实现,值得研究.我们通过限制钠盐摄入,观察CHF大鼠循环和局部RAS的变化,探讨心衰治疗中常规限钠对RAS的影响,以寻求相应治疗措施. 
  1 材料和方法
     
  1.1 材料  采用体质量220~250g的健康SD大鼠35只,雌雄不拘,由武汉大学医学院实验动物中心提供.血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)、醛固酮(aldosterone,Ald)放免分析测定盒(北京北方免疫试剂研究所产品);即用型链霉亲和素过氧化物酶及过氧化物酶阻断剂(福州迈新公司产品);生物素标记血管紧张素原mRNA探针:上海生工生物工程公司合成,序列为5’-XAAAGGGGTGGATGTATACG-CGGTC-3’,X=Biotin,为与血管紧张素原mRNA编码的第25~32位氨基酸密码子互补的寡核苷酸.r计数器:B500201型(美国Packard);图像分析仪:HPIAS-1000型(同济医科大学). 
  1.2 方法 
     
  1.2.1 动物模型的制备  参照文献[5],在大鼠腹主动脉与腔静脉间造一动-静脉瘘,使心脏容量超负荷致大鼠CHF.术后饲常规鼠饲料,自由饮自来水.假手术大鼠除动-静脉间不造瘘外,其他处置相同.术后2wk大鼠转入代谢笼,4wk分流术大鼠随机分为3组:①心衰组:饲常规饲料(每500g饲料含1g钠),饮自来水;②心衰限钠组:饲无盐饲料(除不含盐外其他成分同常规饲料),饮去离子水;③心衰补钠组:饲常规饲料,饮生理盐水(20mL・d-1 ).对照组为假手术大鼠,饲常规饲料,饮自来水.记录日尿量,测尿钠,1wk后处死取材.
     
  1.2.2 血浆和心肌组织AngⅡ,Ald含量测定  大鼠称质量后处死,收集血液约5mL(制备血浆)立即摘取心脏,称质量后速取右心房及心尖部心室组织作匀浆,经0.5mol・L-1 醋酸提取后取上清,按放免分析测定盒说明测定;血钠、尿钠:常规方法测定.
     
  1.2.3 心肌血管紧张素原mRNA表达测定用原位杂交法  心肌组织石蜡包埋,切片3μm,经脱蜡、入水处理后加即用型过氧化物酶阻断剂,冲洗后加蛋白酶K(25mg・L-1 )50μL/片,再次冲洗干燥后加含探针杂交液(探针浓度3mg・L-1 ),最后DAB显色.空白对照:杂交液中不含探针;阴性对照:杂交前切片用RNase处理.结果判断:以显微镜下出现棕黄色颗粒为阳性杂交信号.每片取10个视野,用图像分析仪测定其阳性细胞颗粒的积分吸光度A并求其平均值.
    
  统计学处理:结果用x ±s表示,实验数据行t检验,部分数据进行直线回归和相关分析.
     
  2 结果
     
  2.1 尿量、尿钠及血钠的变化  心衰组大鼠尿量、尿 钠和血钠分别降为对照组的49%,64%(P<0.01)和95%(P<0.05).心衰限钠组较心衰组三者进一步下降13%,34%(P<0.01)和6%(P<0.05).心衰补钠组尿量、尿钠分别增为对照组的201%和437%(P<0.01),血钠恢复至对照组水平.
     
  2.2 血浆和心肌AngⅡ,Ald水平的变化  心衰限钠组血浆和心肌AngⅡ,Ald含量显著高于心衰组;心衰补钠组血浆AngⅡ,Ald和心房AngⅡ降至对照组水平,心室AngⅡ与心衰组无显著差别(Tab1).血浆AngⅡ,Ald水平与血钠水平均呈高度负相关(r=-0.5193,P<0.05;r=-0.676,P<0.01);回归方程分别为:Y=496.583-1.807x,Y=1767.913-8.544x.
     
  表1 充血性心力衰竭大鼠血浆,心肌血管紧张素及醛固铜含量的变化 略
         
  2.3 心肌血管紧张素原mRNA表达  心衰限钠组心肌血管紧张素原mRNA表达水平显著高于心衰组;心衰补钠组与心衰组无显著差别(Tab2).

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