160株新生儿肺炎克雷伯菌的耐药性分析

时间: 2017-12-28 12:00:12 来源:未知 作者:admin 点击:71 次
   【摘要】  目的  分析我院新生儿科病区产ESBLs、AmpC酶的肺炎克雷伯菌的耐药情况,指导临床合理用药。方法  按CLSI 推荐的超广谱β内酰胺酶( ESBLs)确证试验,对肺炎克雷伯菌进行ESBLs检测,并用三维试验法、三维试验抑制试验进行AmpC酶检测。结果  160株肺炎克雷伯菌中,检到产ESBLs肺炎克雷伯菌84株,阳性率高达52.50%。71株耐头孢西丁菌株检到23株产AmpC酶,其中单产AmpC酶5株,产Ampc+ESBLs菌株18株。AmpC酶阳性率为14.38%(23/160)。结论  分离自我院新生儿科的肺炎克雷伯菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药严重,主要以产ESBLs和(或)AmpC酶为主。给临床抗感染治疗带来很大困难,是院内感染的一大隐患。
【关键词】  超广谱β-内酰胺酶  AmpC酶  肺炎克雷伯菌  三维试验  三维抑制试验
        AmpC酶是继ESBLs之后,临床上出现的肠杆菌科细菌的又一重要耐药机制,肺炎克雷伯菌作为条件致病菌是新生儿感染性肺炎的常见病原菌,也是重要的院内感染病原菌,在医院感染分离率一直趋于首位。近年来,由于广谱抗菌药物的广泛大量应用,导致这些细菌出现高产AmpC酶菌株。近年来,编码AmpC酶的基因已转移到质粒上,并在大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌中出现[1],易在不同菌种间横向播散。所以监测和检测这类细菌产ESBLs和AmpC酶的情况,对指导临床合理使用抗菌药物以及预防和控制院内感染的发生具有重要的意义。
        1  材料与方法
        1.1  材料
        1.1.1  菌株来源 肺炎克雷伯菌160株均分离自2008年1月至2008年12月我院新生儿病区患儿呼吸道标本。 
        1.1.2  一次性培养皿与药敏纸片 一次性培养皿为郑州博赛产品;药敏纸片为英国OXOID公司产品。
        1.1.3   试剂  克拉维酸(中国药品生物制品检定所);邻氯西林(上海四药有限公司)。
        1.1.4  质控菌株  E.coli ATCC25922,K.pneumoniae ATCC700603,E.cloacae 029,E.cloacae 029M。
        1.2  方法
        1.2.1 药敏试验  按CLSI推荐的K-B纸片法进行测定,并按其制定的标准进行判读。
        1.2.2 超广谱β-内酰胺酶( ESBLs) 检测  按CLSI推荐的确证试验测定ESBLs。
        1.2.3  产AmpC酶菌株初筛  采用K-B法,按照CLSI推荐的方法进行[2],头孢西丁(30μg/片)抑菌环直径≤17mm时,提示对FOX中介或耐药为疑产AmpC酶菌株。
        1.2.4   β-内酰胺酶粗提取物的制备  取50μl0.5麦氏单位菌液加入12ml胰蛋白胨肉汤中,35℃恒温摇床孵育6h,4000r/min,4℃离心20min,弃上清,将沉淀物-70℃反复冻融5次,加入pH 7.0的0.01mol/L磷酸盐缓冲液1.2ml混匀,14000r/min,4℃离心20min,取上清液即为酶粗提物,无菌试验后-20℃保存。
        1.2.5  三维试验  对可疑菌株的酶提取物用头孢西丁三维试验方法进行AmpC 酶确证。 
        1.2.6  三维试验抑制试验[3]  在涂有E.coli ATCC25922 菌液的M-H平皿中央贴1片30μg头孢曲松纸片,垂直挖四个狭缝,分别加入40μl的试验菌株酶粗提取物、36μl酶粗提取物+4μl 2mmol/L邻氯西林、36μl酶粗提取物+4μl 2mmol/L克拉维酸、36μl酶粗提取物+4μl 2mmol/L克拉维酸+4μl 2mmol/L邻氯西林,35℃培养24h,扩大生长区域消失为酶抑制实验阳性。
        2  结果
        2.1  160株肺炎克雷伯菌耐药现象较为严重,对16种抗菌药物中的13种均出现不同程度的耐药,其中对青霉素类、一代至四代头孢菌素的耐药率均超过60% ,经ESBLs确证试验测定产ESBLs有84株,阳性率高达52.50%。对加酶抑制剂的β内酰胺类复合制剂舒普深、特治星的敏感率仅为55.06%、56.05%,头霉素类的头孢西丁敏感率仅为55.63%,应引起临床重视。尚未出现对碳青酶烯类耐药的肺炎克雷伯菌菌株。

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